استخلاص الحمض النووي الوراثي

استخلاص الحمض النووي الوراثي

--------------------------------------------------------------------------------

الحامض النووي الوراثي يجب ان يفصل عن باقي المواد الخلوية (البروتين) قبل فحصه ، فالبروتينات الخلوية التي تحفظ وتحمي الحمض النووي الوراثي داخل البيئة الخلوية تقف عائقا لايمكننا من فحص الحمض النووي الوراثي الامر الذي طورت من اجله طرق الاستخلاص لفصل البروتينات والمواد الخلوية عن الحمض النووي الوراثي .

تستخدم المختبرات الجنائية ثلاث طرق لاستخلاص الحمض النوي الوراثي هي :
• الاستخلاص العضوي .
• الاستخلاص بمادة Chelex .
• الاستخلاص بواسطة بطاقات FTA .

ويعتمد عزل واستخلاص الحمض النووي الوراثي على نوع الاثر الحيوي المفحوص فمثلا يعامل الدم الطازج بطريقة مختلفة عن بقع الدم الجافة او عينات العظام .

الاستخلاص العضوي يطلق عليه الاستخلاص باستخدام مادة الفينول كلورفورم وقد ظل هذا مستخدما ويتوقع ان يستمر مع تقنية PCR وتقنية RFLP .

ويعتبر الاستخلاص بمادة Chelexاسرع من الاستخلاص العضوي اضافة الى احتوائه على عدد اقل من الخطوات وبالتالي تضاءل فرصة تلوث عينة بأخرى اثناء نقلها من انبوب لآخر فالعملية بكاملها تتم في انبوب واحد ،على الرغم من ان هذه العملية تنتج شريطين منفصلين من الحمض النووي الوراثي ، الامر الذي لا يلائم تقنية PCR ، غير انها تلائم التقنيات المبنية على تفاعل PCR .

عند التعامل مع العينات يجب اخذ الحيطة والحذر لتفادي تلوث العينات جراء انتقال عينة من انبوب لآخر اثناء عملية الاستخلاص وتعتبر مرحلة الاستخلاص من اكثر المراحل عرضة للتلوث لذلك يجب فصل وقت ومكان استخلاص العينات الجنائية عن تلك القياسية .

من الطرق الشائعة لتحضير عينة دم قياسية هو اخذ نقطة دم على قماش قطني ( استخدمت حديثا بطاقات FTA) لتغطي مساحة سنتيمتر مربع ( كل قطرة دم تعادل 10 ميكروليتر ) تحتوي تقريبا 70,000 – 80,000 كرية دم بيضاء وتنتج تقريبا 500 نانوجرام من الحمض النووي الوراثي ويختلف هذا الناتج من عينة لاخرى بناء على عدد كريات الدم البيضاء وفاعلية الطريقة المستخدمة في الاستخلاص .

يخزن الحمض النووي الوراثي المستخلص في درجة حرارة _ 20 مئوية او _ 80 درجة مئوية لتخزينه لفترات طويلة جدا وذلك لتفادي تأثير الانزيمات المحللة (Nuclease) وهي انزيمات موجودة في الخلية تفكك جزيء الحامض النووي الوراثي مما يسمح بتدوير عملية تركيب النيوكليتدات .

وهذه الانزيمات تحتاج لعنصر المغنيسيوم لتعمل بشكل مثالي ولذلك تستخدم في جمع عينات الدم القياسية انابيب تحتوي على مادة EDTA التي ترتبط بعنصر المغنيسيوم وتجعل الانزيمات غير فعالة .